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2024-3-14

一、精選內毒素更低批次細胞對內毒素非常敏感，過高的內毒素可誘導細胞釋放炎癥因子、引導細胞衰老或凋亡。不僅如此，胎牛血清會經常或長時間作用于細胞，一旦內毒素含量過高，細胞相當于長期在“有在毒培養基”中生長，被內毒素影響，細胞將處于“亞健康狀態”，進而影響實驗結果的穩定與準確性。因此，為保證細胞的健康，在培養細胞時，應該選用內毒素含量盡可能低的血清，以保障實驗的順利進行。Ausbian®進口特級胎牛血清，選擇內毒素含量≤3EU/ml，澳洲進口血源，曾經是細胞典藏等重大項目...

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支原體DNA提取用試劑盒通常，如果懷疑細胞有支原體污染，可直接取細胞上清進行支原體PCR檢測。因為存在支原體污染的細胞上清中，支原體密度為通常為106-108個/ml，已足以用于PCR檢測。Minverva公司生產的支原體PCR試劑盒靈敏度高，特異性好，檢測的支原體種類多，很受用戶的歡迎。但有時，支原體檢測前，還需對樣品中的支原體DNA進行提取。那么，什么時候需要提取呢？有如下幾種情況。如細胞培養液中存在抑制PCR的物質，這時就需要提取。細胞培養基中的血清濃度如果超過12%，那么對下游的PCR反應會... 查看詳情 2020-11-18
如何證明支原體祛除噴霧的效果對于消毒劑，藥典有抑菌效力的檢查，那么對于支原體祛除噴霧，是否有對支原體祛除效果的驗證呢？下面以用于常規清潔細胞培養設備的支原體祛除噴霧Mycoplasma-Off™（MinervaBiolabsGmbH）為例，說說它對支原體祛除效果的驗證。首先來看支原體祛除噴霧Mycoplasma-Off™的成分，它里面含有0.05%的Mynox®。Mynox®是一種殺滅支原體的成分。它可以物理性地與支原體膜結合，改變支原體膜的通透性，從而造成支原體... 查看詳情 2020-11-18
PCRdi檢出限芻議現在，PCR試劑盒常用于各種檢測。其中di檢出限是PCR試劑盒一個重要的參數。PCRdi檢出限就是所能檢測到的靶標的di值。di檢出限的確定應通過定量標準品來完成。定量標準品一般是經過嚴格標定拷貝數的陽性DNA，梯度稀釋后進行一系列的檢測，每個梯度做8個復孔，終確定條帶能否觀測到或確定Ct值。示例.PCR定量標準品（支原體）（MinervaBiolabs）接著可用Reed-Muench公式計算方法的檢測限（LOD50），lgLOD50=距離比例×稀釋對數質檢的差+高于50%檢... 查看詳情 2020-11-17
如何選擇適合病毒疫苗生產的新生牛血清盡管無血清培養是疫苗生產工藝的發展趨勢，但仍有許多生產細胞仍采用基礎培養基+新生牛血清的培養工藝。新生牛血清營養豐富，可同時適合懸浮細胞和貼壁細胞，可為貼壁細胞提供粘附基質，細胞也無需馴化。質量較好的新生牛血清，可克服傳統認為血清帶來的兩個不足：1.血清批次間的質量變動，帶來細胞培養和實驗結果的不確定性。這可通過提高每個批次的牛血清產量來部分克服。2.血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。可通過選擇低內毒素牛血清、嚴格外源因子的檢查來解決。輻照能進一步滅活可能的殘余病毒。細胞培... 查看詳情 2020-11-17
提早知道所培養細胞或培養基中是否有細菌污染的一種方法培養細胞時，要避免細菌污染。如果存在細菌污染，則培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯，細胞大多在24小時死亡。在以細胞大規模培養為基礎的生物藥產業中，也需要進行無菌檢查。傳統無菌檢查是采用TSA或TSB培養基培養的方法，一般需要培養14天，觀察是否有菌落生長或溶液渾濁。現介紹一種通過PCR進行無菌檢查的方法，當然該方法也是用于研究。即采用德國MB的細菌檢測試劑盒（OnarBacteriaDetectionKit）。它作為PCR試劑盒，針對的是細菌高度保守的16SrRNA序... 查看詳情 2020-11-17
PCR試劑盒靈敏度與方法驗證概說 PCR方法已廣泛用于科研，在工業中也有不斷擴大應用的趨勢，它包括檢測一些病原體、檢測支原體污染、檢測細菌污染以及檢測殘留宿主DNA等。PCR在工業中的應用主要存在一個方法驗證的問題，尤其是靈敏度的驗證。靈敏度不夠，就會發生漏檢。另外，PCR所直接面對的樣本是DNA，而非病原菌或DNA，因此還需要做DNA抽提，這也是要注意的。下面以支原體PCR檢測為例，略說說靈敏度的驗證。藥典規定，生物藥廠的主細胞庫、工作細胞庫、生產終末細胞、檢定細胞、病毒種子批和病毒收獲液、細胞培養相關材料... 查看詳情 2020-11-16

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